量化肝细胞中乙型肝炎病毒库的新标准
大约有300亿人长期感染乙型肝炎病毒(HBV),可导致肝硬化或癌症。因此,迫切需要开发HBV治疗性疗法。然而,由于HBV独特的复制策略,在临床前和临床研究中对受感染肝细胞中的病毒DNA进行定量在技术上是困难的,并且没有标准化。
由DZIF科学家领导的国际研究联盟现已为定量病毒DNA测量的优化,控制和验证制定了建议,这对于治疗策略的临床前和临床评估至关重要。
HBV是一种特异性感染人类肝细胞的DNA病毒。感染后,病毒的DNA基因组被细胞酶转化为共价闭合环状DNA(cccDNA),通过与细胞染色体蛋白结合在细胞核内形成稳定的迷你染色体。在这种形式中,病毒DNA随后作为形成新病毒颗粒的模板。
临床前和临床HBV研究的一个主要局限性是缺乏标准化的基于PCR的方法来特异性定量HBV感染样品中以cccDNA形式存在的病毒DNA。
作为国际消除HBV联盟(ICE-HBV)支持的国际联盟的一部分,汉堡-埃彭多夫大学医学中心,海德堡大学和慕尼黑工业大学的DZIF科学家与法国国家研究机构(ANRS)以及美国吉利德科学的同事合作,比较协议并制定循证最佳实践指南,通过定量量化cccDNA 聚合酶链反应。
“在比较组织样本中HBV DNA定量的不同方案时,我们发现不同形式的病毒DNA的共存以及样品保存和处理的条件强烈影响基于PCR的HBV cccDNA定量,”DZIF年轻研究员Lena Allweiss博士说,他领导了六个参与实验室的合作。根据研究结果,该团队为HBV cccDNA定量测量的优化,控制和验证制定了样品类型的定制方法学建议。
“该研究将协助HBV治愈研究计划,旨在评估临床前研究和临床试验中疗法对细胞HBV储层的影响,”汉堡大学医学中心DZIF科学家Maura Dandri教授说。